wb封闭完要洗吗
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简述信息一览：
【Western-Blotting】干货!WB步骤及经验分享
Western Blot的主要步骤包括试剂准备、蛋白样品制备、蛋白含量测定、SDSPAGE电泳、上样和电泳、电转、封闭、抗体孵育和化学发光成像：试剂准备：准备电泳液、电转液、TBS、TBST、SDS溶液等。配制封闭液，通常使用5%的脱脂奶粉溶解在1x TBST中。
电泳是Western-Blotting过程中的关键步骤。组装SDS-PAGE时，应遵循特定的顺序，确保凝胶的正确放置。上样前，先加入电泳缓冲液，每孔上样量为10-20 μL，确保蛋白总量在10-20ug。同时，使用10 μL移液器缓慢滴加蛋白marker，以避免溢出。
凝胶选择：常用聚丙烯酰胺凝胶，如30% A：B液，以及Tris甘氨酸或bistris缓冲体系。分离方法：SDSPAGE是最常见的分离方法，适用于大多数情况；nativePAGE保持蛋白天然状态，适合特定研究。电泳过程：需掌握连续电泳和不连续电泳的区别，以及浓缩胶和分离胶体系对分离效果的影响。
史上不一定最全之WB蛋白免疫印迹经验分享
1、Western Blot，即蛋白质印迹技术，是科研中常用的检测特定蛋白质在细胞或组织中表达情况的方法。其核心原理是通过电泳分离蛋白质，然后用特异性抗体进行免疫反应，再通过特定的显色手段检测目标蛋白。显色方法：最常见的显色方法是化学发光ECL，它使用标记的二抗和特定试剂，通过化学反应产生信号。
2、操作步骤从样品准备开始，不论是细胞还是组织，都需要提取总蛋白。细胞提取时，需小心清洗细胞，加入裂解液后在冰上充分裂解。组织处理则需多次研磨确保蛋白充分释放。提取后，测定蛋白含量，通常细胞蛋白稀释20倍，组织50-100倍，以防超出检测范围。
3、首先，理解WB的基本概念：Western Blot，即蛋白质印迹技术，通过抗体检测特定蛋白质在细胞或组织中的表达情况。其核心是电泳分离样品中的蛋白质，然后用抗体进行免疫反应，通过特定的显色手段检测目标蛋白的存在。在操作上，WB显色方法有放射自显影、化学发光ECL、荧光ECF和DAB呈色等。
wb二抗可以回收多少次
1、wb二抗可以回收最多3次。wb用的次数会容易发臭。wb是Westernblot是检测蛋白质混合溶液中某种特定蛋白质的存在与否，确定同一蛋白质在不同样本中的多与少。
2、二抗回收后可用3次。根据相关信息查询显示，wb二抗可以回收3次，wb用的次数会发臭，wb是Westernblot是检测蛋白质混合溶液中某种特定蛋白质的存在，确定同一蛋白质在不同样本中的多少。
3、没有问题，不过应避免反复冻融，可以在4度保存，一般重复回收使用2-3次是没问题的。
4、wb实验中一抗和二抗的作用如下：二抗都是重复利用的。一般都是使用3次左右（时间不超过5天）；做GAPDH时，二抗甚至经常使用5-7次，效果无影响。一抗就是针对你的蛋白的抗体，一般比较特异，若你的蛋白不是常见的，则需要定制（譬如用你的蛋白注射兔子）。
5、电泳液和转膜液都可重复利用3次左右 考马斯亮兰染液也可以重复用。新配的染液10分钟即可，重复3次后要染30分钟。
6、用10ml的TBST洗膜3次，每次5分钟。加入5ml一抗稀释缓冲液（抗体根据说明稀释），室温2小时或者4℃平缓摇动过夜。回收一抗，按5μl/ml一抗液加入叠氮钠（可抑制细菌生长）4℃保存（不常用的抗体可-20℃长期保存），可重复使用。用10ml的TBST洗膜3次，每次5分钟。
关于wb封闭回收利用，以及wb封闭完要洗吗的相关信息分享结束，感谢你的耐心阅读，希望对你有所帮助。
